sgRNA(single guide RNA)是CRISPR-Cas9基因编辑技术中的关键组成部分,其主要作用是指引Cas9核酸酶切割目标DNA序列。在设计sgRNA时,对其进行修饰是非常重要的,以下将从多个方面详细阐述sgRNA设计修饰的原因及具体案例。
- 提高特异性
sgRNA的修饰可以提高其对目标DNA序列的特异性,降低非特异性切割。在sgRNA的5'端添加一段与目标序列互补的序列,称为“spacer”序列,有助于提高sgRNA的结合特异性。此外,还可以通过改造sgRNA的结构,如引入脱氧核苷酸修饰、核苷酸替代等,来提高sgRNA与目标序列的结合稳定性。